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接頭引物

構建測序文庫是整個高通量測序(NGS)過程中尤為關鍵的一步,測序文庫的質量將直接影響后續測序及數據分析。通常,文庫構建方案要求對片段化的DNA進行末端修復,并在其兩端連上特定序列的接頭,擴增以形成滿足高通量平臺測序要求的文庫。高質量的接頭有利于片段DNA與接頭的連接,提高文庫構建效率。



成品接頭

百力格針對Illumina高通量測序平臺開發了超低污染率的UDI接頭(萬分之五和百萬分之一兩種防污染工藝),接頭定量準確且退火效率高。所有接頭均經過嚴格的質量控制和功能驗證,最大程度上保證文庫構建的穩定性和可重復性。

                           

                       UDI接頭                                             Stubby UDI 接頭                                                UMI 接頭





定制化接頭

百力格可以根據客戶需求定向研發和生產不同要求的接頭序列,包括短接頭、全長接頭、不同污染率要求、適用于不同建庫標準的專用接頭等。





接頭性能優勢

1.  退火效率高:優化的退火buffer,退火程序及專用的退火儀器,專用的退火效率檢測方法;

2.  連接效率高,建庫產量高;

3.  污染率低:接頭污染率在萬分之五以內,短接頭達到萬分之一水平;

4.  拆分率高:優化合成工藝,降低接頭oligo的合成錯誤率,達到了最好的數據拆分率;



退火效率

1.  針對NGS接頭優化的退火buffer,既能保證高的退火效率,又能保證接頭在退火buffer中能夠穩定的儲存

2.  針對NGS接頭退火優化的退火程序及大批量退火專用的退火儀器 

3.  建立專用的退火效率檢測方法


 百力格退火檢測(成品接頭)

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                   1-2 為已退火接頭  F-R 為退火引物



連接效率


連接效率檢測方法 :

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                                                    qPCR連接效率=接頭引物qPCR計算出 nM / 標品引物qPCR計算出 nM 

                                                    連接效率高于競品


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建庫產量高于競品   




數據拆分

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污染率

防污染工藝:

1.  百力格接頭防污染工藝,污染率低于萬分之五(96 UDI短接頭,平均污染率萬分之0.85) 

2.  特殊污染源防控合成

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引物合成堿基錯誤率

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通過測序的方式檢測合成illumina接頭引物的堿基錯誤情況




拆分率

拆分率:97.92%


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illumina 接頭包lane檢測拆分率(10nt,允許1錯配)

降低合成錯誤率,提升拆分率